Enfoque de magnetofección para la transformación de okra usando nanopartículas de hierro verde

Scientific Reports volumen 12, Número de artículo: 16568 (2022) Citar este artículo

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El cambio climático, la resistencia a los pesticidas y la necesidad de desarrollar nuevas variedades de plantas han impulsado a los biotecnólogos a encontrar nuevas soluciones para producir plantas transgénicas. Durante la última década, los científicos están trabajando en nanopartículas metálicas verdes para desarrollar sistemas de administración de ADN para plantas. En el presente estudio, se sintetizaron nanopartículas de hierro verde utilizando extracto de hoja de Camellia sinensis (té verde) y cloruro de hierro (FeCl3), la caracterización y confirmación se realizó mediante espectroscopia UV-VIS, FTIR, SEM y TEM. Utilizando estas nanopartículas, se desarrolló un método novedoso de transformación de genes en plantas de okra, con una combinación de diferentes factores de magnetofección. La máxima eficiencia de transformación génica se observó en la proporción de ADN a nanopartículas de hierro de 1:20, mediante la rotación de la mezcla (ADN de plásmido, nanopartículas de hierro y embrión de semilla) a 800 rpm durante 5 h. Usando este enfoque, la transformación del gen GFP (proteína fluorescente verde) se llevó a cabo con éxito en Abelmoschus esculentus (planta Okra). La transformación del ADN se confirmó observando la expresión del transgén GFP a través del microscopio confocal de barrido láser (LSCM) y PCR. Este método es altamente económico, adaptable, independiente del genotipo, ecológico y también ahorra tiempo. Inferimos que este enfoque puede ser una solución potencial para combatir los desafíos de rendimiento e inmunidad de las plantas contra los patógenos.

El avance de la medicina y el amplio uso de fármacos ha desarrollado resistencia en patógenos humanos y vegetales. Por lo tanto, existe la necesidad de desarrollar nuevas variedades de cultivos transgénicos que puedan resistir el cambio climático y resistir el ataque de patógenos. Sin embargo, requiere un método preciso que pueda administrar con éxito ADN extraño a las plantas. En este sentido, a lo largo del siglo XIX se han desarrollado muchos métodos de transformación genética como el método biolístico (pistola de genes)1, la electroporación2, la sonoporación3, la transfección4, la magnetofección5, la fusión de protoplastos6, la microinyección7, la infiltración al vacío8, la transformación mediada por Agrobacterium9, etc. Todo método de transformación genética, ya sea químico, físico o biológico, tiene ciertas limitaciones10. Por ejemplo, la electroporación puede dañar el ADN o hacer que pierda su integridad11. Del mismo modo, la transformación mediada por Agrobacterium no es un método específico de destino12. Todas estas limitaciones han instado a los biólogos a proponer nuevas soluciones para la entrega de ADN.

En todo el mundo, existe una gran preocupación con respecto a la evaluación del riesgo ambiental de diferentes plantas modificadas genéticamente13. Por lo tanto, es importante avanzar hacia las técnicas que presentan un riesgo mínimo. Desde la década pasada, las nanopartículas de hierro verde (GINP) se están sintetizando y utilizando en diferentes campos, como la medicina, la actividad antimicrobiana, el control de la contaminación y la degradación del colorante azoico, etc.14,15,16,17. La síntesis verde es un método alternativo a los métodos químicos y físicos ya que proporciona beneficios económicos y ambientales18. Sin embargo, su uso en la transformación de genes para el tratamiento de enfermedades humanas es bastante nuevo19. Los GINP tienen la capacidad de unión al ADN que se puede utilizar para desarrollar sistemas de administración de ADN20,21. De hecho, este sistema utiliza la técnica de magnetofección para la transformación de genes tanto en las plantas como en las células tumorales22.

Recientemente, los extractos de plantas se utilizan ampliamente en la síntesis de GINP que brindan más estabilidad a las nanopartículas metálicas23. Valentín V. et al. en su estudio de la biosíntesis de nanopartículas de óxido de hierro, sugirió que la presencia de ácidos orgánicos (como los ácidos cítrico u oxálico) ayuda principalmente en la estabilización de las nanopartículas de hierro y que las plantas que tienen estos ácidos orgánicos pueden producir nanopartículas de hierro altamente estables24. Muchos compuestos orgánicos (como flavonoides, alcaloides y saponinas, etc.) están presentes en extractos de plantas que brindan mayor solubilidad y compatibilidad con los GINP25. Además de estos, los GINP reducen el riesgo de toxicidad ambiental; ya que el recubrimiento de partículas metálicas con otros polímeros no biodegradables puede ser dañino26. Por lo tanto, las nanopartículas metálicas preparadas con extractos de plantas y utilizadas como sistema de suministro de ADN en las plantas son mucho más eficientes en comparación con las nanopartículas magnéticas (MNP) preparadas con polímeros sintéticos.

En el estudio actual, hemos preparado los GINP utilizando extracto de hoja de Camellia sinensis. La optimización de Magnetofection se realizó para mejorar la entrega de ADN a través de GINP. Hemos transformado con éxito el gen GFP en Abelmoschus esculentus (Okra). Las hojas de té verde se utilizaron en el estudio porque contienen ácidos orgánicos (como los ácidos cítrico u oxálico), que ayudan en la producción de nanopartículas de hierro estables. Para revolucionar la agricultura, este novedoso método se puede utilizar para transferir genes en las plantas.

Las hojas de la planta de té verde fueron proporcionadas por Arif Ahmed (Jardín Botánico, Universidad de Punjab) y las semillas de Okra fueron proporcionadas amablemente por el Dr. Atif Kamran (Centro de Semillas, Departamento de Botánica, Universidad de Punjab). Todo el trabajo experimental en material vegetal descrito en este estudio cumple con los lineamientos y la legislación institucional, nacional e internacional pertinente.

Las nanopartículas de hierro se sintetizaron y caracterizaron utilizando el método descrito por Wang et al. con modificaciones menores27. Para la preparación de GINP, se mezclaron/remojaron hojas secas (2 g) de planta de té verde (C. sinensis) en 100 ml de agua desionizada tratada en autoclave. La mezcla se calentó a 80 °C en el baño de agua durante 20 min y se filtró con papel de filtro Whatman No.1. Posteriormente se preparó una solución acuosa 0,1 M de Cloruro de Hierro (FeCl3) en 100 mL de agua desionizada tratada en autoclave. Después de eso, el filtrado de la solución de té verde y la solución de FeCl3 se mezclaron en igual proporción en volumen. Finalmente, para obtener las nanopartículas de hierro, la mezcla se centrifugó a 15.000 rpm durante 15 min. Para la aplicación, el sedimento se lavó con agua desionizada en autoclave (Fig. 1a-c).

Preparación de GINP. (a) Extracto de hojas de té verde, solución de FeCl3 0,1 M y nanopartículas de hierro. ( b, c ) sedimento de nanopartículas de hierro sintetizado después de la centrifugación.

Para la identificación inicial, las nanopartículas obtenidas se sometieron a espectroscopía UV-Vis (Espectroscopía Ultravioleta-Visible)28. Para confirmar, las nanopartículas se analizaron mediante FTIR (espectroscopia infrarroja transformada de Fourier), SEM (microscopio electrónico de barrido) y TEM (microscopio electrónico de transmisión).

El ensayo MTT se realizó para el análisis de citotoxicidad de nanopartículas de hierro. Para ello, se cultivaron células J774 en placas de 96 pocillos. Se agregaron nanopartículas de hierro recubiertas con Tween 80 a las células en concentraciones definidas (25, 100, 200, 300, 400 y 500 μg/mL) y se incubaron durante tres y seis horas. Después de la incubación, se descartó el medio y se añadieron 90 μL de medio fresco por pocillo a las células después de un lavado minucioso con solución salina tamponada con fosfato estéril. Luego se agregaron 10 μL (5 mg/mL stock) de reactivo MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) en los pozos y la placa se incubó durante seis horas en una incubadora. . Después de la incubación, se descartó el medio de los pocillos y se añadieron 100 μL de dimetilsulfóxido para solubilizar los cristales de formazán formados. Luego se tomaron lecturas en un lector de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas a 490 nm, con resta para la absorbancia de la placa a 650 nm29. El porcentaje de viabilidad de las células se calculó como la proporción de la absorbancia media de las lecturas por triplicado con respecto a la absorbancia media de los pocillos de control:

En el estudio presentado, se utilizó el plásmido pBIN.35 s-mgfp5-ER (Figura S1)30 que porta un gen GFP modificado. GFP es un gen informador de 717 pb y se puede visualizar en UV (395 nm) o luz azul de longitud de onda de 437 nm. Su nombre de promotor-reportero es CaMV: GFP y su selección es kanamicina (SnapGene).

Las semillas de okra se remojaron durante la noche en agua y luego se sometieron a esterilización superficial con hipoclorito de sodio al 5% durante 20 min. Para obtener el embrión, se eliminó la cáscara de la semilla (Fig. 2a-c).

Vista esquemática de los pasos de transformación. (a) Germinación de semillas de okra; (b) Aislamiento del embrión; (c) embrión aislado; (d) Formación del complejo de nanopartículas de hierro-plásmido; (e) Incubación de embriones en medio MS; (f) Embrión en medio de tiro; (g) plantas en medios de enraizamiento; (h) plantas Después de 15 días; (i) y Diferentes etapas de la planta.

Para la formación de un plásmido (pBIN.35 s-mgfp-ER)-complejo de nanopartículas de hierro, el plásmido y las nanopartículas se tomaron en eppendorf, se mezclaron y se mantuvieron a temperatura ambiente durante 10 min. Los embriones aislados se sumergieron en un tubo de 1,5 ml que tenía un complejo de nanopartículas de hierro y plásmido (Fig. 2d). Para proporcionar un campo magnético, el eppendorf se colgó en un vaso de precipitados que contenía perlas magnéticas (perla magnética Thermo Scientific™ Nalgene™-2,125 pulgadas, número de catálogo: DS6630-0250). El vaso de precipitados se colocó en el agitador magnético a ciertas rpm y tiempo (Fig. 3).

Magnetofección: ilustración de la entrega de ADN utilizando GINP.

Teniendo en cuenta los tres factores: relación ADN-Nanopartícula (DNR), tiempo de campo magnético (utilizado para la magnetofección) y revolución por minuto (rpm), se diseñaron 27 tratamientos con 10 repeticiones. Cada tratamiento se sometió a una combinación diferente de DNR, rpm y tiempo de campo magnético (Tabla 1).

El eppendorf (que contenía GINP y embrión de okra) se colgó en un vaso de precipitados. El vaso de precipitados se colocó en un agitador magnético para proporcionar un campo magnético y agitar a un tiempo y rpm específicos. La ilustración se preparó utilizando la herramienta en línea BioRender (https://biorender.com/).

Se usó el medio MS (Murashige y Skoog), que contenía kanamicina, para hacer crecer el embrión usando los tubos de cultivo de tejidos. El embrión se colocó en los medios basales en condiciones esterilizadas de flujo de aire laminar (Fig. 2e). Después de eso, los tubos se incubaron a 28 °C durante 21 días en una cámara de crecimiento de plantas (Fig. 2f-i). Después de la germinación, se verificó la presencia de GFP en la planta de okra utilizando un microscopio confocal de barrido láser (LSCM) (Fig. 4a, b) y mediante la amplificación del gen GFP (Fiqure 4c y Fig. S2) a través de la reacción en cadena de la polimerasa ( PCR).

La confirmación de la transformación del gen GFP mediante microscopio confocal de barrido láser y PCR (a, b). La fluorescencia verde en las plantas transgénicas de Okra confirmó la entrega del gen y su expresión exitosa del gen GFP. ( c ) Los amplicones de PCR también correspondían a 200 pb en comparación con la escalera de ADN que confirma la entrega del gen GFP.

Para la amplificación del ADN se diseñaron cebadores específicos (Forward: 5′-ATGAGTAAAGGAGAAGAA-3′, Reverse: 3′-CATAAGAGAAAGTAGTG-5′) para amplificar las primeras 200 pb del gen mgfp5. Para la PCR, se preparó una mezcla de reacción de 25 μl para tener 3 μl (20 ng/μl) de ADN molde, 2,5 μl de tampón Taq-polimerasa 10 × (Fermentas, MA, EE. UU.), 2,5 μl de dNTP (2 mM), MgCl2 ( 1,5 mM), 2 μl de cebadores directos e inversos y 0,25 μl de polimerasa Taq (Fermentas, MA, EE. UU.).

El termociclador se programó para degradación inicial a 94 °C durante 2 min seguido de 35 ciclos (94 °C durante 30 s, 58 °C durante 30 min y 72 °C durante 45 s). La extensión final se realizó durante 10 min a 72 °C. Para la confirmación, los amplicones de PCR se corrieron en gel de agarosa al 1 % (bromuro de etidio; 0,5 μg/mL) y las bandas de ADN se observaron utilizando el sistema de documentación digital Gel (Fig. 4c).

Los datos de 270 embriones se sometieron a un análisis de varianza (ANOVA) (Fig. 5) seguido de la prueba de diferencia menos significativa protegida (LSD) de Fisher al nivel de probabilidad del 5 % utilizando el software Statistix 8.1 (https://www.statistix. com/). El tamaño de los GINP se midió usando una imagen TEM con la ayuda de ImageJ (https://imagej.net) y las frecuencias del tamaño se calcularon usando OriginLab (https://www.originlab.com).

El efecto de diferentes tratamientos en la entrega de genes. Tres factores: proporción de ADN a nanopartículas (DNR), tiempo de magnetofección (h) y revolución por minuto (rpm). El tratamiento No. 14 arrojó el mayor número de plantas transgénicas que incluyen ración 1:20 DNR, 5 h de magnetofección con 800 rpm.

Bajo el examen de espectroscopia UV-VIS (Fig. 6a), las nanopartículas de hierro mostraron espectros entre 350 y 450 nm que validan la formación de nanopartículas de hierro. El espectro FTIR (espectroscopía infrarroja por transformación de Fourier) de nanopartículas de hierro verde se muestra en la (Fig. 6b).

El espectro UV-VIS (a) y FTIR (b) de las nanopartículas de hierro verde. (a) La absorbancia de las nanopartículas de hierro verde fue máxima a 395 nm y ese rango confirma la presencia del complejo Fe-Cl dentro de la muestra16. (b) El espectro FTIR de nanopartículas indica la presencia de bandas en 3410, 2924, 2050, 1633, 1041, 671 y 599 cm−1.

El espectro FTIR de nanopartículas indica la presencia de bandas en 3410, 2924, 2050, 1633, 1041, 671 y 599 cm−1. Las bandas mencionadas pueden deberse al estiramiento N–H, –CH, N=C, C=C y enlaces C–Cl. La presencia de enlaces C-Cl en la región de la huella dactilar del espectro (1041, 671 y 599 cm−1) confirma la unión de FeCl3 con el extracto de té verde. Las frecuencias más altas del tamaño de los GINP estaban entre 7,5 y 12,5 nm, como se muestra en la Fig. 7c. La micrografía de SEM y TEM se muestra en (Fig. 7a, b).

El análisis SEM y TEM de GINP y distribución de tamaño de GINP. (a) Representa el SEM y (b) destaca el análisis TEM de los GINP. ( c ) El histograma indica que el tamaño de los GINP estaba entre el rango de 5 a 40 nm. Sin embargo, las frecuencias más altas estuvieron entre 7,5 y 12,5 nm.

Los resultados del ensayo MTT demostraron que las células expuestas a GINP de tamaño medio de 30 nm durante tres y seis horas dieron como resultado una citotoxicidad dependiente del tiempo y de la concentración. A una concentración de 25 μg/ml, la viabilidad de las células a las tres y seis horas fue del 100 % y del 95 %, respectivamente. Con el aumento de la concentración de GINP (25, 100, 200, 300, 400 y 500 μg/mL), el porcentaje de viabilidad disminuyó del 100 % a aproximadamente el 75 % en 3 h. Cuando las células se incubaron con la misma concentración de GINP durante 6 ha 25 y 100 μg/ml, la viabilidad celular fue similar a la de las tres horas. Por el contrario, a 200 μg/mL y concentraciones más altas, la viabilidad disminuyó significativamente, en un rango de 55 a 65 % (Fig. 8).

El análisis de citotoxicidad de GINPs. Los efectos de las nanopartículas de óxido de hierro superparamagnético sobre la proliferación celular y la viabilidad de las células J774 según lo determinado por el ensayo MTT. Efectos citotóxicos de nanopartículas dependientes de la concentración evaluados después de tres y seis horas de incubación. Los resultados se representan como medias ± error estándar de la media. *Diferencia significativa con el control (P < 0,05).

La entrega del gen GFP en plantas del tratamiento no. 14 se confirmó que el tamaño de los amplicones de PCR correspondía al tamaño objetivo (200 pb) en comparación con la escalera de ADN (Fig. 4c). En la expresión en plantas, la GFP produce fluorescencia verde cuando se observa bajo LSCM. En nuestro estudio, LSCM confirmó la fluorescencia verde en las plantas de okra (Fig. 4b). Sin embargo, no hubo fluorescencia verde en las plantas de control cuando se investigaron bajo LSCM (Fig. 4a).

El análisis estadístico mostró que el tratamiento no. 14 (1 µL de ADN por 20 µL de solución de nanopartículas de hierro, dado el campo magnético durante 5 ha 800 rpm) produjo el número máximo de plantas transgénicas, es decir, 9 de cada 10 fueron transgénicas (Fig. 5). El alto tiempo de magnetofección y rpm provocó una baja producción de plantas transgénicas. Incluso una DNR grande tampoco aumentó la entrega de genes a las plantas.

Después de observar la mejor transformación del tratamiento no. 14, se repitió el experimento con 30 plantas de okra sometidas al tratamiento no. 14 es decir, 1 µL de ADN por 20 µL de solución de nanopartículas de hierro, sometido al campo magnético durante 5 ha 800 rpm y siguiendo el mismo procedimiento de germinación mencionado anteriormente. Los resultados obtenidos mostraron una tasa de éxito del 90% ya que 27 de 30 plantas eran transgénicas.

La ingeniería genética de plantas ha allanado una nueva dirección para cultivos mejorados, acelerando el progreso de la industria agrícola mundial. Previamente, se han introducido muchos métodos para la transformación de genes, pero cada método tiene sus propias limitaciones31,32. La entrega de genes, con la ayuda de nanopartículas metálicas, es un nuevo enfoque en el campo de la biotecnología. Sin embargo, estas nanopartículas metálicas se sintetizaron previamente utilizando polímeros o cualquier otro material de recubrimiento33,34. Varios informes han indicado la toxicidad causada por el uso de polímeros en sistemas de administración de fármacos mediados por nanopartículas35,36,37. En el presente estudio, utilizamos el método de síntesis verde para la producción de nanopartículas, ya que es ecológico, menos tóxico, más estable y rentable (ya que en lugar de máquinas de alta energía y productos químicos costosos, se utilizan plantas). Sobre todo, ahorra tiempo, ya que la síntesis verde es un proceso de biorreducción de un solo paso (Fig. 9)38.

Diagrama esquemático que muestra la absorción del complejo plásmido-nanopartículas por planta.

El uso de nanopartículas como transportador molecular en animales, plantas y humanos; nanomateriales para la terapia génica y la terapia del cáncer se ha informado en estudios anteriores. Algunos de los ejemplos destacados incluyen; el uso de Au-NP (nanopartículas de oro) para silenciar la polo-loke-quinasa-1 (PKL1) que causa la apoptosis de la célula dañada y protege a las células circundantes para que no se vean afectadas. En otro estudio, para mejorar el suministro de Au-NP a las células mesenquimales derivadas de la médula ósea (MSC)39,40,41. Peng et al. utilizó péptidos antimicrobianos extraídos de la lactoferrina para recubrir Au-NP42. Zhi et al. utilizó nanopartículas de óxido de grafeno (GO) para la administración de microARN21 (mir21) y adriamicina (un fármaco contra el cáncer) para superar la resistencia tumoral a múltiples fármacos, in vitro43. Recientemente, se utilizó el "enfoque verde" para recubrir las nanopartículas de óxido de hierro superparamagnéticas (SPION) con extractos de plantas de stevia44. Las nanopartículas generadas por enfoques ecológicos son de baja toxicidad, biocompatibles y tienen una función superior.

Hemos optimizado con éxito el método de magnetofección para la entrega de genes utilizando los GINP. Sin causar ningún daño a las células, el hierro (III) puede unirse fácilmente al ADN y esta propiedad es útil para los biotecnólogos para desarrollar un método de transformación de genes45. Sin embargo, para este propósito, requiere un tiempo de magnetofección adecuado y un número específico de revoluciones y DNR fijo. Significativamente, nuestros resultados mostraron que 1:20 DNR, 800 rpm durante 5 h es óptimo para producir el máximo número de plantas transgénicas a través de la entrega de genes. Contrariamente a esto, mayores rpm y tiempo han reducido el número de plantas transgénicas. En un estudio, Lai y Singh46 concluyeron que el hierro, en presencia de un campo magnético, puede iniciar una reacción de Fenton que da como resultado daños en el ADN. Por lo tanto, esta podría ser la razón por la que se produce un menor número de plantas transgénicas cuando se exponen al campo magnético durante más tiempo.

El tamaño de las nanopartículas también es importante para la transfección y las nanopartículas de tamaño pequeño son más eficientes para la entrega de genes47,48. Paralelamente, Wang et al.49 utilizaron un método de gelificación iónica para producir nanopartículas de quitosano de tamaño pequeño (100-200 nm) para la administración de genes. Sin embargo, en nuestro estudio, el tamaño promedio de los GINP es de 6 nm a 40 nm, de los cuales se observó la frecuencia más alta entre 7,5 nm y 12,5 nm que puede ser más confiable para la transfección.

Previamente, ha habido mucha investigación sobre el uso de nanopartículas para la entrega de genes en plantas para la mejora de cultivos50,51. Demirer et al. en su estudio presentó un sistema de entrega basado en nanomateriales que permite la entrega de ADN con alta eficiencia y sin toxicidad o daño tisular y sin integración transgénica en plantas52. De hecho, puede reemplazar fácilmente los métodos tradicionales de administración de genes para las plantas53. Este método de entrega de genes a través de GINP no solo muestra resultados consistentes prometedores y produce líneas estables con mayor viabilidad que los sistemas de entrega de genes tradicionales, sino que también posee la capacidad de superar las restricciones de la transmisión de genes recalcitrantes de varias especies de plantas. Por lo tanto, nuestro método recientemente desarrollado podría usarse fácilmente para mejorar los cultivos de manera segura en muy poco tiempo, ya que no es tóxico y es rentable. Este enfoque también puede permitirnos abordar las limitaciones abióticas de las plantas y, en última instancia, hacerlas más adaptables para el cultivo en condiciones ambientales desfavorables.

La entrega de genes mediada por nanopartículas puede desempeñar un papel importante en el establecimiento de una plataforma nueva y estable para la ingeniería genética. En el estudio presentado, el enfoque de magnetofección demostró ser un método prometedor para la transformación utilizando nanopartículas como vehículo. Este estudio se basa en un enfoque de magnetofección competente con baja citotoxicidad. Las NP de hierro se sintetizaron a partir de C. sinensis mediante síntesis verde, que es un enfoque más ecológico. Este método de entrega de genes a través de GINP no solo muestra resultados consistentes prometedores y produce líneas estables con mayor viabilidad que los sistemas de entrega de genes tradicionales, sino que también posee la capacidad de superar las restricciones de la transmisión de genes recalcitrantes de varias especies de plantas. Esta técnica se puede utilizar para la transformación de las variedades de cultivos susceptibles actuales en otras más resistentes que tengan un alto rendimiento, haciendo frente a los desafíos del ataque de patógenos y las pérdidas de rendimiento resultantes de una manera más rentable y respetuosa con el medio ambiente al evitar el uso de pesticidas tóxicos. Además, también se puede aplicar para superar las restricciones regionales debido a limitaciones abióticas que prohíben el cultivo de cultivos económicamente importantes (Cifras complementarias).

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Los autores están muy agradecidos con la Universidad de Punjab por proporcionar fondos para completar el trabajo de investigación y la universidad de la guarnición de Lahore por el apoyo y la provisión de instalaciones de laboratorio.

Departamento de Biotecnología, Lahore Garrison University, PO BOX. 54000, Lahore, Pakistán

Naila Farooq, Laraib Ather y Qamar Abbas

Departamento de Horticultura, Facultad de Ciencias Agrícolas, Universidad de Punjab, PO BOX. 54590, Lahore, Pakistán

Muhammad Shafiq

Laboratorio de Virología, Universidad de Agricultura CABB, Faisalabad, Pakistán

Muhammad Shah Nawaz-ul-Rehman

Departamento de Fitopatología, Facultad de Ciencias Agrícolas, Universidad de Punjab, PO BOX. 54590, Lahore, Pakistán

Muhammad Haseeb, Tehmina Anjum, Mujahid Hussain y Numan Ali

Departamento de Agronomía, Facultad de Ciencias Agrícolas, Universidad de Punjab, PO BOX. 54590, Lahore, Pakistán

Syed Agha Armaghan Asad Abbas

Facultad de Ciencias Agrícolas, Universidad de Punjab, PO BOX. 54590, Lahore, Pakistán

Sehrish Mushtaq y Muhammad Saleem Haider

Instituto de Bioquímica, Biotecnología y Bioinformática (IBBB), Universidad Islamia de Bahawalpur, PO BOX. 63100, Bahawalpur, Pakistán

Saleha Sadiq

Centro de Investigación y Educación del Norte de Florida, 155 Research Rd., Quincy, FL, 32351, EE. UU.

Muhammad Adnan Shahid

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NF, LA, MS, TA, QA, SAAAA, NA, Muj.H, Muh.H y SM participaron en el análisis de datos. MS y TA proporcionaron la dirección general y el diseño experimental. NF, LA, QA, Muj.H, Muh.H, SAAAA, NA y SM escribieron el manuscrito. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.

Correspondencia a Muhammad Shafiq o Muhammad Adnan Shahid.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Reimpresiones y permisos

Farooq, N., Ather, L., Shafiq, M. et al. Enfoque de magnetofección para la transformación de okra utilizando nanopartículas de hierro verde. Informe científico 12, 16568 (2022). https://doi.org/10.1038/s41598-022-20569-x

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Recibido: 30 de octubre de 2021

Aceptado: 15 de septiembre de 2022

Publicado: 04 octubre 2022

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-022-20569-x

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